Malachite Green (MG) và Crystal Violet (CV) là hai loại phẩm màu tổng hợp được sử dụng rộng rãi trong các ngành công nghiệp dệt nhuộm. Ngoài ra‚ do đặc tính kháng khuẩn‚ chúng còn được dùng để điều trị các bệnh truyền nhiễm ở cá và lươn. Các chất này‚ mặc dù có thể giúp kiểm soát bệnh tật và tăng năng suất‚ nhưng lại kèm theo hậu quả đáng lo ngại. Tồn dư kháng sinh trong sản phẩm thủy sản không chỉ ảnh hưởng đến sức khỏe của người tiêu dùng mà còn gây tác động tiêu cực đến môi trường. Do đó‚ kiểm soát việc sử dụng kháng sinh trong nuôi trồng thủy sản là một vấn đề cấp thiết.

 

 

Trong nghiên cứu này‚ cột chiết pha rắn SPE Bond Elut Plexa PCX của Agilent được sử dụng để chiết MG‚ CV và các chất chuyển hóa của chúng là Leuco-Malachite Green (LMG) và Leuco-Crystal Violet (LCV) trong mẫu cá‚ rồi phân tích bằng LC-MS/MS.

		Malachite Green (MG)	Leuco-Malachite Green (MG)
		Crystal Violet (CV)	Leuco-Crystal Violet (CV)

 

TÓM TẮT QUY TRÌNH XỬ LÝ MẪU:

- Cân 1 g mẫu cá đã đồng nhất vào ống ly tâm

- Thêm 50 µL dung dịch TMPD và 10 mL dung dịch đệm McIlvaine:Acetonitrile (1:1 v/v)

- Lắc 1 phút‚ ly tâm với tốc độ 4500 vòng/phút trong 5 phút và chuyển dịch chiết vào một ống ly tâm khác

- Tiếp tục thêm 5 mL dung dịch đệm McIlvaine:Acetonitrile (1:1 v/v) vào ống chứa mẫu rắn để chiết lần hai

- Lắc 1 phút‚ ly tâm với tốc độ 4500 vòng/phút trong 5 phút

- Gộp dịch chiết thu được từ 2 lần chiết vào cùng một ống ly tâm

- Hoạt hóa cột Bond Elut Plexa PCX bằng 2 mL methanol và sau đó cân bằng với 2 mL acid formic (FA) 2% trong nước

- Cho dịch chiết qua cột SPE với tốc độ khoảng 1 mL/phút

- Rửa cột bằng 2 mL FA 2% trong nước‚ 2 mL methanol và 2 mL hexane.

- Hút chân không trong 3 phút để cột khô hoàn toàn

- Rửa giải cột bằng 4 mL dung dịch đệm với tốc độ 1 mL/phút. [Đệm rửa giải gồm 50 mL dung dịch ammonium acetate 5 mol/L (pH = 7)‚ 100 mL ethyl acetate và 350 mL metanol]

- Thêm nước vào dịch rửa giải đến 5 mL và vortex trong 10 giây

- Cho dịch mẫu vào vial 2 mL để phân tích trên thiết bị

 

              Sơ đồ quy trình chiết pha rắn

 

TÓM TẮT PHƯƠNG PHÁP:

- Xử lý mẫu: Bond Elut Plexa PCX SPE Cartridge‚ 60 mg‚ 3 mL‚ 50/pk (12108603)

- Bộ chiết pha rắn SPE: Agilent Vac Elut 20 Manifold with collection rack for 13 x 100 mm test tubes (12234101)

- Thiết bị phân tích: Agilent 1200 HPLC +  Agilent 6460 Triple Quadrupole LC-MS/MS

- Cột phân tích: InfinityLab Poroshell 120 EC-C18‚ 2.1 x 50 mm‚ 2.7 µm (699775-902)

- Pha động A: 5 mM Ammonium aceate trong nước
  Pha động B: 0.1% Acid formic trong ACN

- Nhiệt độ cột: Nhiệt độ phòng

- Thể tích tiêm: 5 µL

- Tốc độ dòng: 0.4 mL/phút

 

Sắc ký đồ phân tích mẫu cá thêm chuẩn nồng độ 10 ng/g trên cột Agilent Poroshell 120 EC-C18

 

Kết quả cho thấy cột SPE Bond Elut Plexa PCX của Agilent đạt hiệu quả tốt trong việc làm sạch và làm giàu chất phân tích trên mẫu cá. Hiệu suất thu hồi dao động từ 96 đến 109% với độ lặp lại trong khoảng 1.7-4.5%. Phương pháp đạt giới hạn định lượng 0.5 ng/g cho cả 4 hợp chất MG‚ LMG‚ CV‚ LCV trong mẫu cá.

 

Tham khảo tài liệu bên dưới để biết chi tiết về các bước xử lý mẫu‚ điều kiện chạy máy và kết quả phân tích. Nếu có bất kỳ thắc mắc nào về phương pháp cũng như các sản phẩm của Agilent‚ vui lòng liên hệ với chúng tôi qua inbox hoặc email: techsupport@sacky.com.vn.

• Phương pháp phân tích dư lượng MG‚ LMG‚ CV và LCV trong cá